测定蛹虫草多糖的方法 蛹虫草的虫草多糖

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测定蛹虫草多糖的方法 蛹虫草的虫草多糖

中药材行业科普文章

蛹虫草，是一种珍贵的中药材，具有丰富的营养和独特的药理作用。其中最重要的成分之一就是虫草多糖。如何测定蛹虫草中的虫草多糖呢？本文将详细介绍蛹虫草多糖的测定方法，并带您了解蛹虫草的虫草多糖在中医药领域的应用。

蛹虫草多糖是蛹虫草中的重要药用成分，其主要来源是蛹虫草的子实体。虫草多糖具有抗氧化、抗肿瘤、免疫调节等多种生物活性。根据多年的研究，蛹虫草多糖已被广泛应用于中医药领域，主要用于治疗肺癌、乳腺癌等恶性肿瘤和免疫功能低下的疾病。

为了让读者更好地理解蛹虫草多糖的作用，我将为大家分享一个真实的医案故事。某位患者年过五旬，长期工作繁忙导致身体虚弱，免疫力低下，经常感到疲倦无力。经过中医师的诊断，他被判断为脾胃虚弱，气血不足。医师根据其体质特点和病情，开出了一方中药处方，其中包括了蛹虫草的虫草多糖。经过连续服用一段时间后，患者的体力和精神状态明显好转，免疫力得到增强，再次恢复了旺盛的精力。

那么为什么脾胃虚弱的患者需要服用蛹虫草的虫草多糖呢？中医认为脾胃为人体的消化吸收中心，脾胃虚弱会导致气血不足，进而影响免疫系统的功能。而蛹虫草的虫草多糖具有补中益气、健脾养胃的功效，可以帮助患者改善脾胃功能，增加气血供应和免疫力。

通过这个医案故事，我们可以看出蛹虫草的虫草多糖在中药治疗中的重要作用。它不仅可以治疗脾胃虚弱、免疫力低下等症状，还可以提高人体的健康水平和生活质量。

需要提醒大家的是，在使用蛹虫草的虫草多糖之前，请务必咨询专业的中医师或中药师的建议。根据个人体质和病情，遵循医嘱进行使用。毕竟，每个人的身体状况都有所不同，因此合理用药是保障健康的关键。

蛹虫草多糖的测定方法为中医药领域的研究提供了基础。通过医案故事的分享，我们了解到蛹虫草的虫草多糖在中医药治疗中的重要作用，特别是在改善脾胃虚弱、增强免疫力方面的功效。为了保证健康安全，请在使用过程中谨慎选择和正确使用。

测定蛹虫草多糖的方法 蛹虫草的虫草多糖

1.工艺流程2.工艺条件

（1）离心，离心沉降分离发酵菌液中的菌丝体。

（2）浓缩，将发酵液浓缩至原体积的1/5。

（3）透析，上清液浓缩液置于透析袋中，于流水中透析至不含还原糖为止。

（4）冷却，将透析液进一步浓缩，离心除去不溶物，冷却至室温。

（5）沉淀，加入3倍预冷至5℃的95%乙醇，5～10℃静置12h以上，沉淀粗多糖。

（6）粗干品，沉淀物分别用无水乙醇、丙醇、乙醚洗涤，真空干燥，然后置P2O5的干燥器中进一步干燥，即为胞外多糖的粗干品。

测定多糖含量的方法

糖的测定方法一般有四种方法：

1、 直接滴定法。原理为 糖还原天蓝色的氢氧化铜为红色的氧化亚铜。缺点：水样中的还原性物质能对糖的测定造成影响。2、 高锰酸钾滴定法。所用原理同直接滴定法。缺点：水样中的还原性物质能对糖的测定造成影响，过程较为复杂，误差大。3、硫酸苯酚法。糖在浓硫酸作用下，脱水形成的糠醛和羟甲基糠醛能与苯酚缩合成一种橙红色化合物，在10-100mg范围内其颜色深浅与糖的含量成正比，且在485nm波长下有最大吸收峰，故可用比色法在此波长下测定。苯酚法可用于甲基化的糖、戊糖和多聚糖的测定，方法简单，灵敏度高，实验时基本不受蛋白质存在的影响，并且产生的颜色稳定160min以上。缺点：如果水样呈橙红色（大部分水样为黄色），会对比色法造成较大的干扰。4、蒽酮法糖在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糠醛和羟甲基糠醛，生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物，在一定范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比，故可用于糖的测定。缺点：，不同的糖类与蒽酮试剂的显色深度不同，果糖显色最深，葡萄糖次之，半乳糖、甘露糖较浅，五碳糖显色更浅。综合比较；采用蒽酮法能将最为准确地测定尾水中糖的含量。（一） 直接滴定法Ⅰ、原理 v 一定量的碱性酒石酸铜甲、乙液等量混合，立即生成天蓝色的氢氧化铜沉淀，这种沉淀很快与酒石酸钠反应，生成深蓝色的可溶性酒石酸钾钠铜络合物。在加热条件下，以次甲基蓝作为指示剂，用标液滴定，样液中的还原糖与酒石酸钾钠铜反应，生成红色的氧化亚铜沉淀，待二价铜全部被还原后，稍过量的还原糖把次甲基蓝还原，溶液由蓝色变为无色，即为滴定终点。根据样液消耗量可计算出还原糖含量。

样品经除去蛋白质后，在加热条件下，以次甲基蓝做指示剂，滴定标定过的碱性酒石酸铜溶液（用还原糖标准溶液标定碱性酒石酸铜溶液），根据样品溶液消耗体积计算还原糖量。 Ⅱ、仪器和试剂

1．仪器

酸式滴定管，可调电炉（带石棉板），250ml容量瓶。

2．试剂1. 盐酸。2. 碱性酒石酸铜甲液：称取15g硫酸铜（CuSO4·5H2O）及0.05g次甲基蓝，溶于水中并稀释至1000mL。3. 碱性酒石酸铜乙液：称取50g酒石酸钾钠与75g氢氧化钠，溶于水中，再加入4g亚铁氰化钾，完全溶解后，用水稀释至1000 ml，贮存于橡胶塞玻璃瓶内。4. 乙酸锌溶液：称取21.9 g乙酸锌，加3ml冰乙酸，加水溶解并稀释至100ml。5. 亚铁氰化钾溶液：称取10.6g亚铁氰化钾，用水溶解并稀释至100ml。6. 葡萄糖标准溶液：准确称取1.0000g经过96℃±2℃干燥2h的纯葡萄糖，加水溶解后加入5ml盐酸，并以水稀释至1000L。此溶液相当于1mg/ml葡萄糖（注：加盐酸的目的是防腐，标准溶液也可用饱和苯甲酸溶液配制）。7. 果糖标准溶液：按⑹操作，配制每毫升标准溶液相当于1mg的果糖。8. 乳糖标准溶液：按⑹操作，配制每毫升标准溶液相当于1mg的乳糖。9. 转化糖标准溶液：准确称取1.0526g纯蔗糖，用100ml水溶解，置于具塞三角瓶中加5ml盐酸（1+1），在68℃~70℃水浴中加热15min，放置至室温定容至1000ml，每ml标准溶液相当于1.0mg转化糖。Ⅲ、实验步骤

1．样品处理

⑴ 乳类、乳制品及含蛋白质的食品：称取约2.50～5.00g固体样品（吸取25～50ml液体样品），置于250 ml容量瓶中，加50 ml水，摇匀。边摇边慢慢加入5ml乙酸锌溶液及5ml亚铁氢化钾溶液，加水至刻度，混匀。静置30 min，用干燥滤纸过滤，弃去初滤液，滤液备用。（注意：乙酸锌可去除蛋白质、鞣质、树脂等，使它们形成沉淀，经过滤除去。如果钙离子过多时，易与葡萄糖、果糖生成络合物，使滴定速度缓慢；从而结果偏低，可向样品中加入草酸粉，与钙结合，形成沉淀并过滤。） ⑵ 酒精性饮料：吸取100ml样品，置于蒸发皿中，用1 mol/L氢氧化钠溶液中和至中性，在水浴上蒸发至原体积1/4后，移入250ml容量瓶中，加水至刻度。 ⑶ 含多量淀粉的食品：称取10.00～20.00g样品，置于250ml容量瓶中，加200ml水，在45℃水浴中加热1h，并时时振摇（注意：此步骤是使还原糖溶于水中，切忌温度过高，因为淀粉在高温条件下可糊化、水解，影响检测结果。）。冷后加水至刻度，混匀，静置，沉淀。吸取200ml上清液于另一250ml容量瓶中，慢慢加入5ml乙酸锌溶液及5ml亚铁氢化钾溶液，加水至刻度，混匀，沉淀，静置30 min，用干燥滤纸过滤，弃去初滤液，滤液备用。 ⑷ 汽水等含有二氧化碳的饮料：吸取100ml样品置于蒸发皿中，在水浴上除去二氧化碳后，移入250ml容量瓶中，并用水洗涤蒸发皿，洗液并入容量瓶中，再加水至刻度，混匀后备用。（注意：样品中稀释的还原糖最终浓度应接近于葡萄糖标准液的浓度。） 2. 标定碱性酒石酸铜溶液：吸取5.0ml碱性酒石酸铜甲液及5.0ml乙液，置于150ml锥形瓶中（注意：甲液与乙液混合可生成氧化亚铜沉淀，应将甲液加入乙液，使开始生成的氧化亚铜沉淀重溶），加水10 ml，加入玻璃珠2粒，从滴定管滴加约9 ml葡萄糖标准溶液或其他还原糖标准溶液，直至溶液兰色刚好褪去为终点，记录消耗的葡萄糖标准溶液或其他还原糖标准溶液总体积，平行操作三份，取其平均值，计算每10 ml（甲、乙液各5 ml）碱性酒石酸铜溶液相当于葡萄糖的质量或其他还原糖的质量（mg）。（注意：还原的次甲基蓝易被空气中的氧氧化，恢复成原来的蓝色，所以滴定过程中必须保持溶液成沸腾状态，并且避免滴定时间过长。） 3. 样品溶液预测：吸取5.0 ml碱性酒石酸铜甲液及5.0 ml乙液，置于150 ml锥形瓶中，加水10 ml，加入玻璃珠2粒，控制在2 min内加热至沸，趁沸以先快后慢的速度，从滴定管中滴加样品溶液，并保持溶液沸腾状态，待溶液颜色变浅时，以每两秒1滴的速度滴定，直至溶液蓝色褪去，出现亮黄色为终点。如果样品液颜色较深，滴定终点则为兰色褪去出现明亮颜色（如亮红），记录消耗样液的总体积。（注意：如果滴定液的颜色变浅后复又变深，说明滴定过量，需重新滴定。） 当试样溶液中还原糖浓度过高时应适当稀释，再进行正式测定，使每次滴定消耗试样溶液的体积控制在与标定碱性酒石酸酮溶液时所消耗的还原糖标准溶液的体积相近，约在10ml左右。当浓度过低时则采取直接加入10ml样品溶液，免去加水10ml，再用还原糖标准溶液滴定至终点，记录消耗的体积与标定时消耗的还原糖标准溶液体积之差相当于10ml试样溶液中所含还原糖的量。4. 样品溶液测定：吸取5.0 ml碱性酒石酸铜甲液及5.0 ml乙液，置于150 ml锥形瓶中，加水10 ml，加入玻璃珠2粒，在2 min内加热至沸，快速从滴定管中滴加比预测体积少1 ml的样品溶液，然后趁沸继续以每两秒1滴的速度滴定直至终点。记录消耗样液的总体积，同法平行操作两至三份，得出平均消耗体积。 5. 计算

样品中还原糖的含量（以某种还原糖计）按下式计算。

X=〔A/(m×V/250×1000)〕×100

式中：X--样品中还原糖的含量(以某种还原糖计)，单位 g/100g；

A—碱性酒石酸铜溶液（甲、乙液各半）相当于某种还原糖的质量，单位 mg；

m--样品质量，单位 g；

V--测定时平均消耗样品溶液的体积，单位 ml；

计算结果保留小数点后一位。 注意：滴定结束，锥形瓶离开热源后，由于空气中氧的氧化，使溶液又重新变蓝，此时不应再滴定。（二）高锰酸钾滴定法v 原理 将样液与一定量过量的碱性酒石酸铜溶液反应，还原糖将二价铜还原为氧化亚铜，经过滤，得到氧化亚铜沉淀，加入过量的酸性硫酸铁溶液将其氧化溶解，而三价铁盐被定量地还原为亚铁盐，用高锰酸钾标准溶液滴定所生成的亚铁盐，根据高锰酸钾溶液消耗量可计算出氧化亚铜的量，再从检索表中查出氧化亚铜量相当的还原糖量，即可计算出样品中还原糖含量。（三）硫酸苯酚法Ⅰ、原理糖在浓硫酸作用下，脱水形成的糠醛和羟甲基糠醛能与苯酚缩合成一种橙红色化合物，在10-100mg范围内其颜色深浅与糖的含量成正比，且在485nm波长下有最大吸收峰，故可用比色法在此波长下测定。苯酚法可用于甲基化的糖、戊糖和多聚糖的测定，方法简单，灵敏度高，实验时基本不受蛋白质存在的影响，并且产生的颜色稳定160min以上。多糖在硫酸的作用下先水解成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后与苯酚生成橙黄色化合物。再以比色法测定。Ⅱ、试剂1． 浓硫酸：分析纯，95.5%2． 80%苯酚：80克苯酚（分析纯重蒸馏试剂）加20克水使之溶解，可置冰箱中避光长期储存。3． 6%苯酚：临用前以80%苯酚配制。（每次测定均需现配）4． 标准葡聚糖（Dextran,瑞典Pharmacia）,或分析纯葡萄糖。5． 15%三氯乙酸（15%TCA）：15克TCA加85克水使之溶解，可置冰箱中长期储存。6． 5%三氯乙酸（5%TCA）：25克TCA加475克水使之溶解，可置冰箱中长期储存。7． 6mol/L 氢氧化钠：120克分析纯氢氧化钠溶于500ml水。8． 6mol/L 盐酸Ⅲ、操作。1．制作标准曲线：准确称取标准葡聚糖（或葡萄糖）20mg于500ml容量瓶中，加水至刻度，分别吸取0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6及1.8ml,各以蒸馏水补至2.0ml，然后加入6%苯酚1.0ml及浓硫酸5.0ml,摇匀冷却，室温放置20分钟以后于490nm测光密度，以2.0ml水按同样显色操作为空白，横坐标为多糖微克数，纵坐标为光密度值，得标准曲线。2．样品含量测定：①取样品1克（湿样）加1ml 15%TCA溶液研磨，再加少许5％TCA溶液研磨，倒上清液于10毫升离心管中，再加少许5％TCA溶液研磨，倒上清液，重复3次。最后一次将残渣一起到入离心管。注意：总的溶液不要超出10毫升。（既不要超出离心管的容量）。②离心，转速3000转/分钟，共三次。第一次15分钟，取上清液。后两次各5分钟取上清液到25毫升锥形比色管中。最后滤液保持18毫升左右。（测肝胰腺样品时，每次取上清液时应过滤。因为其脂肪含量大容易夹带残渣。）③水浴，在向比色管中加入2毫升6mol/L 盐酸之后摇匀，在96℃水浴锅中水浴2小时。④定容取样。水浴后，用流水冷却后加入2毫升6mol/L 氢氧化钠摇匀。定容至25毫升的容量瓶中。吸取0.2 ml的样品液，以蒸馏补至2.0ml，然后加入6%苯酚1.0ml及浓硫酸5.0ml,摇匀冷却室温放置20分钟以后于490nm测光密度。每次测定取双样对照。以标准曲线计算多糖含量。Ⅳ、注意（1）此法简单、快速、灵敏、重复性好，对每种糖仅制作一条标准曲线，颜色持久。（2）制作标准线宜用相应的标准多糖，如用葡萄糖，应以校正系数0.9校正μg数。（3）对杂多糖，分析结果可根据各单糖的组成比及主要组分单糖的标准曲线的校正系数加以校正计算。（4）测定时根据光密度值确定取样的量。光密度值最好在0.1——0.3之间。比如：小于0.1之下可以考虑取样品时取2克，仍取0.2ml样品液，如大于0.3可以减半取0.1ml的样品液测定。（四）蒽酮法Ⅰ、实验原理糖在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糠醛和羟甲基糠醛，生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物，在一定范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比，故可用于糖的测定。该法的特点是几乎可以测定所有的碳水化合物，不但可以测定戊糖和己糖，而且可以测所有的寡糖类和多糖类，其中包括淀粉、纤维素等（因反应液中的浓硫酸可以把多糖水解成单糖而发生反应。用蒽酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量。在没有必要细致划分各种碳水化合物的情况下，用蒽酮法可以一次测出总量。不同的糖类与蒽酮试剂的显色深度不同，果糖显色最深，葡萄糖次之，半乳糖、甘露糖较浅，五碳糖显色更浅。故测定糖的混合物时，常因不同糖类的比例不同造成误差，但测定单一糖类时，则可避免此种误差。Ⅱ、试剂：蒽酮试剂，0.20 g蒽酮溶入100 mL 95%浓硫酸中，冰箱保存；Ⅲ、方法：样品2.0 mL加5.0 mL蒽酮试剂，混匀，然后水浴煮沸10 min，取出冷却至室温，在620 nm处测定其吸光度，根据标准曲线计算水样中糖的浓度。（标线以葡萄糖为标样）

蛹虫草的虫草多糖

蛹虫草的主要化学成分和保健功能与天然冬虫夏草很相似，更难得的是，它拥有比冬虫夏草更多的有效成分。蛹虫草安全、可控的培养方式，从根源上避免了不可持续开采、坐地起价、无法保障成分安全等问题。

《全国中草药汇编》明确指出蛹虫草可作为冬虫夏草入药。

多糖测定的方法有哪些

4种糖的测定方法

1、 直接滴定法。

原理为 糖还原天蓝色的氢氧化铜为红色的氧化亚铜。缺点：水样中的还原性物质能对糖的测定造成影响。

2、 高锰酸钾滴定法。

所用原理同直接滴定法。缺点：水样中的还原性物质能对糖的测定造成影响，过程较为复杂，误差大。

3、硫酸苯酚法。

糖在浓硫酸作用下，脱水形成的糠醛和羟甲基糠醛能与苯酚缩合成一种橙红色化合物，在10-100mg范围内其颜色深浅与糖的含量成正比，且在485nm波长下有最大吸收峰，故可用比色法在此波长下测定。苯酚法可用于甲基化的糖、戊糖和多聚糖的测定，方法简单，灵敏度高，实验时基本不受蛋白质存在的影响，并且产生的颜色稳定160min以上。

缺点：如果水样呈橙红色（大部分水样为黄色），会对比色法造成较大的干扰。

4、蒽酮法

糖在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糠醛和羟甲基糠醛，生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物，在一定范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比，故可用于糖的测定。

缺点：，不同的糖类与蒽酮试剂的显色深度不同，果糖显色最深，葡萄糖次之，半乳糖、甘露糖较浅，五碳糖显色更浅。

综合比较；采用蒽酮法能将最为准确地测定尾水中糖的含量。

虫草酱油虫草多糖的测定

虫草多糖是以冬虫夏草菌丝粉为原料，通过现代科学提取手段精制而成的一种高分子多糖，是一种国际公认的免疫调节剂。虫草多糖具有抗癌活性，能对肿瘤起抑制作用、亦可增强机体对各种病菌、病毒、真菌及寄生虫的抵抗力。在国际上抗癌、抗放射、抗肝炎等药物的研究中，虫草多糖是一种非常有作用、有前途的物质，已广泛应用于医药与保健食品的生产与研究中，为人类的健康事业服务。虫草多糖是虫草的主要活性物质，我公司生产的虫草多糖是虫草中之精品。药理实验表明以下几种功效：

1、免疫调节作用

2、降低血糖作用

3、增加脾脏营养血流量。

4、具有降血脂、康动脉粥样硬化作用

5、抗病毒、保肝等作用

6、对尿蛋白、血清肌酐、尿素氮和肾指数又降低作用

具有耐缺氧、镇静作用

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